人子宮內(nèi)膜癌細胞相關(guān)培養(yǎng)

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人子宮內(nèi)膜癌細胞相關(guān)培養(yǎng)

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人子宮內(nèi)膜癌細胞相關(guān)培養(yǎng)

細胞因子(cytokine，CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì)，具有調(diào)節(jié)固有免疫 和適應(yīng)性免疫 、血細胞生成、細胞生長以及損傷組織修復(fù)等多種功能。細胞因子可被分為白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長因子等。眾多細胞因子在體內(nèi)通過旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌等方式發(fā)揮作用，具有多效性、重疊性、拮抗性、協(xié)同性等多種生理特性，形成了十分復(fù)雜的細胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，參與人體多種重要的生理功能。細胞因子的作用方式

重組細胞因子要求:

1. 真實性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測其真實性。

2. 純度:應(yīng)用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度。

3. 生物活性:進行相應(yīng)的體外(in vitro)或體內(nèi)(in vivo)活性檢測。

4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析，SDS-PAGE電泳檢測;必要時應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。

5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測內(nèi)毒素。

6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。

重組細胞因子的狀態(tài):

市場上主流的重組蛋白產(chǎn)品，多在不含載體蛋白或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等)的條件下，以低鹽的形式做凍干處理，因此微量(多以微克計量)的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層，所以建議在收到試劑后，務(wù)必于開蓋前先離心20-30秒，使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于凍干館的底部(此時能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象)。

 (一)根據(jù)產(chǎn)生細胞因子的細胞種類不同分類

1.淋巴因子(lymphokine) 于命名，主要由淋巴細胞產(chǎn)生，包括T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞等。重要的淋巴因子有IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IFN-γ、TNF-β、GM-CSF和神經(jīng)白細胞素等。2.單核因子(monokine) 主要由單核細胞或巨噬細胞產(chǎn)生，如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、G-CSF和M-CSF等3.非淋巴細胞、非單核-巨噬細胞產(chǎn)生的細胞因子 主要由骨髓和胸腺中的基質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞等細胞產(chǎn)生，如EPO、IL-7、IL-11、SCF、內(nèi)皮細胞源性IL-8和IFN-β等。

(二)根據(jù)細胞因子主要的功能不同分類

1.白細胞介素(interleukin, IL) 1979年開始命名。由淋巴細胞、單核細胞或其它非單個核細胞產(chǎn)生的細胞因子，在細胞間相互作用、免疫調(diào)節(jié)、造血以及炎癥過程中起重要調(diào)節(jié)作用，凡命名的白細胞介素的cDNA基因克隆和表達均已成功，已報道有三十余種(IL-1―IL-38)。2.集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF) 根據(jù)不同細胞因子刺激造血干細胞或分化不同階段的造血細胞在半固體培養(yǎng)基中形成不同的細胞集落，分別命名為G(粒細胞)-CSF、M(巨噬細胞)-CSF、GM(粒細胞、巨噬細胞)-CSF、Multi(多重)-CSF(IL-3)、SCF、EPO等。不同CSF不僅可刺激不同發(fā)育階段的造血干細胞和祖細胞增殖的分化，還可促進成熟細胞的功能。3.干擾素(interferon, IFN) 1957年發(fā)現(xiàn)的細胞因子，zui初發(fā)現(xiàn)某一種病毒感染的細胞能產(chǎn)生一種物質(zhì)可干擾另一種病毒的感染和復(fù)制，因此而得名。根據(jù)干擾素產(chǎn)生的來源和結(jié)構(gòu)不同，可分為IFN-α、IFN-β和IFN-γ，他們分別由白細胞、成纖維細胞和活化T細胞所產(chǎn)生。各種不同的IFN生物學(xué)活性基本相同，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等作用。4.腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF) zui初發(fā)現(xiàn)這種物質(zhì)能造成腫瘤組織壞死而得名。根據(jù)其產(chǎn)生來源和結(jié)構(gòu)不同，可分為TNF-α和TNF-β兩類，前者由單核-巨噬細胞產(chǎn)生，后者由活化T細胞產(chǎn)生，又名淋巴毒素(lymphotoxin, LT)。兩類TNF基本的生物學(xué)活性相似，除具有殺傷腫瘤細胞外，還有免疫調(diào)節(jié)、參與發(fā)熱和炎癥的發(fā)生。大劑量TNF-α可引起惡液質(zhì)，因而TNF-α又稱惡液質(zhì)素(cachectin)。5.轉(zhuǎn)化生長因子-β家族(transforming growth factor-β family, TGF-β family) 由多種細胞產(chǎn)生，主要包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGFβ1β2以及骨形成蛋白(BMP)等。6.生長因子(growth factor,GF)如表皮生長因子(EGF)、血小板衍生的生長因子(PDGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、肝細胞生長因子(HGF)、胰島素樣生長因子-I(IGF-1)、IGF-Ⅱ、白血病抑制因子(LIF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、抑瘤素M(OSM)、血小板衍生的內(nèi)皮細胞生長因子(PDECGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-α(TGF-α)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)等。7.趨化因子家族(chemokinefamily) 包括四個亞族:(1)C-X-C/α亞族，主要趨化中性粒細胞，主要的成員有IL-8、黑素瘤細胞生激活性(GRO/MGSA)、血小板因子-4(PF-4)、血小板堿性蛋白、蛋白水解來源的產(chǎn)物CTAP-Ⅲ和β-thromboglobulin、炎癥蛋白10(IP-10)、ENA-78;(2)C-C/β亞族，主要趨化單核細胞，這個亞族的成員包括巨噬細胞炎癥蛋白1α(MIP-1α)、MIP-1β、RANTES、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1/MCAF)、MCP-2、MCP-3和I-309。(3)C型亞家族的代表有淋巴細胞趨化蛋白。(4)CX3C亞家族，Fractalkine是CX3C型趨化因子，對單核-巨噬細胞、T細胞及NK細胞有趨化作用。

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