NIH/3T3細(xì)胞之正確轉(zhuǎn)染

產(chǎn)品名稱：NIH/3T3細(xì)胞

中文名稱：小鼠胚胎細(xì)胞

種屬：小鼠

來(lái)源：胚胎；自發(fā)永生；雄性；NIH Swiss

培養(yǎng)條件：DMEM

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

2017年新學(xué)期，迎著朝陽(yáng)，放飛夢(mèng)想，久別重逢，相聚一堂，百尺竿頭，更進(jìn)一步，學(xué)無(wú)止境，自立自強(qiáng)，為國(guó)爭(zhēng)光，慧穎細(xì)胞庫(kù)為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛(ài)，在新學(xué)期開(kāi)學(xué)之際，將慧穎細(xì)胞庫(kù)1223株細(xì)胞特惠出售，更多活動(dòng)詳情，請(qǐng)致電市場(chǎng)部！

NIH/3T3細(xì)胞之正確轉(zhuǎn)染

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（*轉(zhuǎn)染）和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染兩類。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA 既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染則指外源DNA/RNA 不整合到宿主染色體中，一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。

轉(zhuǎn)染方法不同，對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果影響很大。常見(jiàn)的轉(zhuǎn)染方法有：

1. 磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA 復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞原理得到瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果，操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差，不可用于原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。

2. DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞，可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，方法相對(duì)簡(jiǎn)便、結(jié)果可重復(fù)但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用。

3. 電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細(xì)胞致死率高，DNA 和細(xì)胞用量大， 需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。

4. 病毒介導(dǎo)法：通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中。適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等。

5. 陽(yáng)離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞從而形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時(shí)性轉(zhuǎn)。該方法適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。

6. 顯微注射法：用顯微操作將DNA 直接注入靶細(xì)胞核，適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞。

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