HPB-ALL細胞
中文名稱：兒童 T 急性淋巴細胞白血病

1640培養基；10%胎牛血清；1%雙抗；復蘇5-7天，凍存次日發貨

1973 年從一名確診患有急性淋巴細胞白血病 (ALL) 和胸腺瘤的 14 歲男孩的外周血中建立。外顯子組和 RNA 序列數據可用（參見參考文獻 18187 和外顯子組序列和 RNA-Seq）圓形至多形細胞在懸浮液中單獨或成簇生長，懸浮生長。

STR原始數據圖譜，支原體、真菌、細菌檢測報告 T25瓶80%密度提供發貨照片；≥1*106凍存管2支；二選一 1、提供代數靠前細胞 2、公司常年有不同買饋贈、等活動形式 3、價格優勢 4、售后服務到位，專業技術一對一操作指導

HPB-ALL細胞培養注意兩點：

1）對細胞密度要求高，懸浮細胞是獨立的，如果密度低，細胞容易破裂，細胞膜比較薄

2）對血清要求高，操作者經驗也要足

細胞接收處理過程：

1、請顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時 細胞狀態的依據。

2、收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，不開瓶蓋放培養 箱靜置2-3小時穩定細胞狀態。

3、鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的培養液收集至離心管中，重新加入6ml培養基，放入37℃、5%CO2培養 箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存。

4、懸浮細胞需離心收集處理。抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心3-5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照 說明書細胞培養條件新配制的培養基）。

（注意：若發貨的是密封培養瓶，處理完后放入培養箱培養，記得培養瓶蓋子擰松，初次傳代使用T25培養瓶或6cm小皿1傳2）

貼壁細胞漂浮的處理方法:

注意：部分細胞由于貼壁松散，會出現運輸后漂浮，冬天氣溫低時也會出現細胞收縮漂浮，屬于不可避免 因素，正確處理后均可以正常生長。

STEP1：將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管，離心收集細胞(1200rpm約250g-300g離心力，離心3-5min)去除舊培養基;

STEP2：用PBS重懸細胞，將所有細胞收集到一個離心管中，再次離心(1200rpm約250g-300g離心力，離心3-5min)去除PBS;

STEP3：加入1ml左右胰酶EDTA溶液，0.25%重懸細胞，混勻即可，建議震動離心管混勻，避免吹打細 胞，放入培養箱消化細胞，根據細胞特性決定消化時間(TM3、TM4、293 系列約1~2分鐘);

注意：部分細胞不能使用胰酶消化，請注意查看細胞說明書;單顆漂浮的細胞不需要胰酶處理。

STEP 4：消化好后，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，迅速加入3-5ml含10%以上血清的培養基混勻終止消化，離心(1200rpm 3min)去除胰酶;

STEP5:加入5ml左右的細胞培養基混勻，按比例接入無菌培養瓶中;

STEP6:顯微鏡下觀察細胞是否成均勻分散的單顆細胞，若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化，使之貼壁后待細胞生長穩定后再次傳代消散細胞。

懸浮細胞收集的處理方法:

注意：瓶中運輸培養基不能繼續使用，請換用按照說明書培養條件新配制的培養基來培養細胞。培養 懸浮細胞建議用未經TC處理的培養瓶。

STEP1:靜置4h后，請將瓶內所有細胞收集至6個15ml 的離心管110g(1000rpm)  離心3min, 將所有離心 后的細胞沉淀收集到一個T25 培養瓶內，平放10分鐘，鏡下觀察細胞密度，拍照記錄后放入培養箱中繼 續培養，第二天密度達到80%即可傳代；

STEP2:懸浮細胞半換液處理：將培養瓶豎立在培養箱中靜置1小時左右，輕輕吸掉瓶內3ml 培養 基，然后補給3ml 的細胞培養基，傳代的時候可以直接補給5ml 細胞培養基，分兩個培養瓶 培養，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞；

STEP3:懸浮細胞傳代方法：觀察細胞無碎片無死細胞的情況下，建議直接加入新鮮的細胞培養基直 接分瓶即可。

售后服務：

1.常溫細胞為 T25 培養瓶發貨，若收到細胞后狀態差，活率低，請當天拍照記錄，發給技術支持或 者銷售人員；根據情況，不能調整或者調整培養一周后，狀態沒好轉的，可給予重發細胞。

2. 收到細胞24小時內出現細菌、真菌、霉菌污染給于免費重發。4 8 小 時檢測支原體陽性無條件重發 。(吸取上清至冰箱保存48小時之后檢測的不算準確結果)收到細胞有污染現象，請于收貨當天 及時拍照記錄，提供清晰的照片(照片為原培養瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細胞狀態的照片);在培養 瓶未開封的情況下，可給予重發細胞。

3.若收到細胞有漏液現象，請于收貨當天及時拍照記錄(照片為原培養瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細 胞狀態的照片);請保留原瓶培養基，并將原瓶培養基轉移到一個無菌的容器內培養，培養3天內出現 細胞污染現象，可給予重發細胞。

4. 收到常溫細胞時狀態無異常，用戶自身操作導致細胞污染、細胞狀態不佳、細胞凍存后復蘇不活 的，不予免費重發。

5. 細胞培養時，使用其他非細胞培養體系外源試劑處理導致細胞出現問題，不予免費重發。

6.非細胞出廠質量問題，客戶自身操作導致的細胞死亡，自收貨日起一個月內可以申請低價二次購 買折扣(原代細胞除外)。

7.細胞相關實驗受多種因素影響，非細胞鑒定問題，實驗數據不理想的，不予退/換細胞。

常溫細胞收貨注意事項：

觀察是否有異?，F象

收到貨后如發現有任何異?，F象，如污染，漏液，細胞漂浮等，請拍照記錄，并及時聯系我們銷售 人員或者技術支持。

將培養瓶放置培養箱中靜止

用75%酒精擦拭瓶身，封口膜可以不用撕去，將 T25 瓶置于培養 箱中靜置2~4h 后進行操作，(注意：懸浮細胞請將培養瓶豎立在 培養箱中靜置),在此期間，請查看說明書以確定細胞屬性。

觀察細胞密度是否超過80%

觀察細胞密度，若超過80%則可正常傳代處理(有些原代細胞不 可傳代，請仔細查閱細胞說明書并根據實際情況決定),傳代推 薦比例1:2。

注意：傳代比例指的是同等大小容器的前提下，如需更換培養容器，則需換算培 養容器貼壁面積，例如：一個T25 瓶的貼壁面積相當于1個6cm 的皿，1個10cm  的皿的貼壁面積相當于3個T25瓶，1個T75瓶的貼壁面積相當于3個T25 瓶。

觀察細胞密度，若細胞密度不到80%,建議吸出運輸培養基，加入5ml 細胞培養基，培養到可傳代密度。

特殊細胞收到注意事項

部分細胞由于貼壁不牢在運輸過程中發生細胞脫落，這是正常現象，正確處理后都可以正常生長。

1、將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管，離心收集細胞（1200rpm3-5min）去除舊培養基；

2、用PBS重懸細胞，將所有細胞收集到一個離心管中，再次離心（1200rpm3-5min）去除PBS；

3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養箱消化，根據細胞特性決定消化時間（約1~2分鐘）；

4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，迅速加入3-5ml培養基混勻以終止消化，離心（1200rpm3-5min） 去除胰酶；

5、加入5ml左右細胞相應的培養基混勻，按比例接入無菌培養瓶/皿中；

6、顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單顆細胞，若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化，使之貼壁，待細胞生長穩定后再 消散細胞。