LAD2/LAD-2細胞培養(yǎng)方法

產(chǎn)品名稱：LAD2細胞、LAD 2細胞、LAD-2細胞

中文名稱：人肥大細胞肉瘤/白血病細胞

年齡: 44歲（44 years）

性別: 男（Male）

細胞類型: 肥大細胞（Mast cell）

生長特性: 懸浮生長（Suspension）

慧穎生物提供P1代LAD2/LAD-2細胞，復(fù)蘇周期2周左右，僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

拆包/儲存：

1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進

行培養(yǎng)傳代

注意：如為凍存管，請收到后立即解凍培養(yǎng)。若來不及解凍，請儲存于液氮中（存儲于負80度，會降低細胞存活率）

培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟：

對于懸浮培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培

養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中細胞所受震蕩。

1. 收到細胞產(chǎn)品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置

顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。

2. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于37℃培養(yǎng)箱中直至溫度平衡，隨后，在生

物安全柜中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5mL培養(yǎng)基吹散細胞。

3. 對上述細胞懸液進行細胞計數(shù)及活力檢測，調(diào)整細胞密度至 2- 3×105cells/mL，并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中。

4. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5% CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如

果細胞達到傳代培養(yǎng)的密度，則進行傳代培養(yǎng)。

凍存細胞操作步驟：

注意：為保存細胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存 管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

4.用培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。

5. 將細胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

懸浮細胞傳代培養(yǎng):

懸浮細胞的傳代可通過補加或置換新鮮培養(yǎng)基的方式來完成，具體做法如下：

1. 取出少量細胞懸液進行細胞計數(shù)及活力檢測，當細胞密度達到1.5×106 cells/mL 時，進行細胞傳代培養(yǎng)。

2. 取足量細胞加入到盛有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，將細胞密度維持在5×105cells/mL。

3. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 。如果細胞達到傳代培養(yǎng)的密度 ，則進行傳代培養(yǎng)。

培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。

注意：培養(yǎng)瓶應(yīng)使用帶濾膜瓶蓋，以保持培養(yǎng)基中的空氣和CO2

細胞凍存：

離心收集細胞后，加入適量凍存液（每管細胞凍存量達到10的6次方），將凍存管放入凍存盒置于負80冰箱，24h后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮長期保存。

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