單克隆抗體的應用

上海慧穎生物科技有限公司

       1975年Kohler和Milstein首先報道，用細胞雜交技術，使經綿羊紅細胞(SRBC)免疫的小鼠的脾細胞，與小鼠的骨髓瘤細胞融合，并由此創建了*個B細胞雜交瘤細胞株，獲得了抗SRBC的單克隆抗體。這是免疫學乃至醫學*的一個里程碑。

單克隆抗體的特點是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結合的特異性強、便于人為處理和質量控制，并且來源容易。這些優點使它一問世就受到高度重視，并廣泛應用于生物學和醫學研究領域。

1 作為親合層析的配體

單克隆抗體能與其相應的抗原特異性結合，因而能夠從復雜系統中識別出單個成分。只要得到針對某一成分的單克隆抗體，利用它作為配體，固定在層析柱上，通過親合層析，即可從復雜的混和物中分離、純化這一特定成分。如用抗人絨毛膜促性腺激素(hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的hCG。與其它提取方法(沉淀法、疏水色譜法等)相比，具有簡便、快速、經濟、產品活性高等優點。

2 作為生物治療的導向武器

脂質體是由既親水又親油的兩親磷脂組成的連續雙分子層微囊，內含水相空間，可包裹水溶性物質。包有細胞毒劑的脂質體膜上偶聯抗體，可定向攻擊靶細胞，稱為免疫脂質體。這種“導向治療”，在動物試驗與體外試驗中已獲得滿意效果。如熱敏免疫脂質體，由抗人乳癌細胞抗體經疏水長鏈脂肪酸修飾，抗體帶上長的疏水碳鏈，部分插入脂質體的脂雙層膜中，抗體Fab段仍暴露在膜表面，因而保持了抗體活性。熱敏免疫脂質體可特異識別靶細胞(人乳癌細胞)，并通過相變溫度引起脂質體破裂，從而定向釋放藥物。另外，可將化療藥物、細菌毒素、植物毒素或放射性同位素等細胞毒劑與抗腫瘤抗原的單克隆抗體直接交聯，利用其導向作用，使細胞毒劑定位于腫瘤細胞把它直接殺傷。這不僅提高了抗體的療效，也可降低細胞毒劑對正常細胞的毒性反應。如應用抗T細胞單抗和柔紅霉素結合物，在體外對非T淋巴細胞就無殺傷作用。但是，要把這種方法應用于臨床，目前還存在不少技術難關，包括人體對鼠源單抗的排異問題等。

3 作為免疫抑制劑

抗人T淋巴細胞單抗(McAb)作為一種新型免疫抑制劑，已廣泛應用于臨床治療自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反應。其作用機理有賴于McAb的種類及其免疫學特性。注射抗小鼠Thy-1抗原的單抗，可以抑制小鼠同種皮膚移植的排斥反應。此外，對用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經抗T細胞單抗加補體處理，能減輕移植物抗宿主病的發生。

4 作為研究工作中的探針

單克隆抗體只與抗原分子上某一個表位(即抗原決定簇)相結合，利用這一特性就可把它作為研究工作中的探針。此時，可以從分子、細胞和器官的不同水平上，研究抗原物質的結構與功能的關系，進而并可從理論上闡明其機理。如用熒光物質標記單抗作為探針，能方便地確定與其結合的相應生物大分子(蛋白質、核酸、酶等)在細胞中的位置和分布。

5 增強抗原的免疫原性

抗體對抗原免疫原性的增強作用由來已久，60年代就已發現幼豬對破傷風類毒素難以產生抗體，注射相應特異性抗體IgG，就能有效地提高對委內瑞拉馬腦炎病毒的免疫應答。1984年以來，Celis等發現，抗乙肝病毒(HBs)IgG可增強HBs抗原對特異性人T細胞克隆的刺激增殖，并可誘生干擾素。在小鼠中發現，當低劑量的HBs抗原不產生免疫反應時，加入抗HBs抗體組成的復合物，則可有效地誘生免疫反應。根據這一作用，現已研制出乙肝的抗原—抗體復合物型治療性疫苗。

6 作為醫學檢驗試劑

單克隆抗體作為醫學檢驗試劑，更能充分發揮其優勢。單克隆抗體的特異性強，大大提高了抗原—抗體反應的特異性，減少了和其它物質發生交叉反應的可能性，使試驗結果可信度更大。單抗的均一性和生物活性的單一性，使抗原—抗體區應結果便于控制，利于標準化和規范化。目前已有許多檢驗試劑盒用單抗制成，其主要用途如下：

(1)診斷各類病原體

這是單抗應用zui多的領域，已有大量診斷試劑商品供選擇。如用于診斷乙肝病毒、丙肝病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒和各種微生物、寄生蟲感染的試劑等。單抗所具有的靈敏度高、特異性好的特點，使其在鑒別菌種的型及亞型、病毒變異株，以及寄生蟲不同生活周期的抗原性等方面更具*優勢。

(2)腫瘤特異性抗原和腫瘤相關抗原的檢測

用于腫瘤的診斷、分型及定位。盡管目前尚未制備出腫瘤特異性抗原的單抗，但對腫瘤相關抗原(如甲胎蛋白、腫瘤堿性蛋白和癌胚抗原)的單抗早就用于臨床檢驗。

隨著淋巴細胞雜交瘤技術的應用，許多抗人腫瘤標記物的雜交瘤細胞株已經建立，這為腫瘤的早期診斷及其闡明腫瘤的發生、發展，了解腫瘤細胞的生物學活性及其定量研究奠定了基礎。用抗腫瘤單抗檢查病理標本，可協助確定轉移腫瘤的原發部位。以放射性核素標記單抗可用于體內診斷，再結合X-線斷層掃描技術，可對腫瘤的大小及其轉移灶作出定量診斷。

(3)檢測淋巴細胞表面標志

用于區分細胞亞群和細胞的分化階段。例如檢測CD系列標志，有利于了解細胞的分化和T細胞亞群的數量和質量變化，這對多種疾病診斷具有參考意義。細胞表面抗原的檢測，將對白血病患者的疾病分期、治療效果、預后判斷等方面有指導作用。組織相容性抗原檢測是移植免疫學的重要內容，應用單抗對其進行位點檢測可得到更可信的結果。

(4)機體微量成分的測定

應用單抗結合其它技術，可對機體的多種微量成分進行測定。如放射免疫分析，即是利用了同位素的靈敏性和抗原-抗體反應的特異性而建立起來的方法，它可以測至10-9～10-12g，使原來難以測定的激素能夠進行定量分析。除了激素，還可檢測諸多酶類、維生素、藥物和其它生化物質。這對受檢者健康狀態判斷、疾病檢出、指導診斷和臨床治療均具有實際意義。

綜上所述，單克隆抗體在理論和實踐上的應用成為解決生物學和醫學等許多重大問題的重要手段。但是，上述應用的單抗屬于鼠源性，用于人類疾病的預防和治療時會產生異種蛋白變態反應，大大限制了其臨床應用價值。而且，鼠源性抗體在人體內半衰期縮短，生物活性降低。因此，人們一直致力于人源性抗體的研究，如用人脾細胞與鼠骨髓瘤細胞雜交；用EB病毒轉化人的B淋巴細胞；用基因工程法制備嵌合抗體等。但都遇到相當的困難。以分子生物學技術提取、擴增編碼人抗體的DNA，構建質粒，建立組合抗體文庫，再利用供者文庫建立針對某一特定抗原的子文庫是近年來形成的方法。以該技術制備的抗體片段(Fab)是人源抗體，具有建庫簡單、抗體表達穩定等特點。迄今已有多種抗體產生。可以預見，該技術具有良好的發展和應用前景。