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細胞培養(yǎng)技術(shù)屬于細胞工程范疇，細胞工程包括細胞融合技術(shù)、單克隆抗體的制備、核移植技術(shù)（克?。┑?而這些技術(shù)中都有細胞培養(yǎng)過程,所以說細胞培養(yǎng)是生物學研究的zui基本技術(shù)之一。

上?；鄯f生物供應NP69-SV40T永生化人鼻咽上皮細胞，活性好、存活率高。隨著細胞生物學尤其是干細胞研究的快速發(fā)展，在細胞治療領域已經(jīng)進行了大量的探索，取得了一系列的令人振奮的成果，且部分基礎研究成果已經(jīng)在心血管系統(tǒng)疾病 、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼相關疾病、糖尿病等。

養(yǎng)細胞經(jīng)驗分享：

1.細胞形態(tài)觀察。細胞膜是每天必須觀察的，看是否清晰，細胞的死亡往往是從細胞膜的破裂開始的，早期的表現(xiàn)就是細胞膜某一點出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。

2.細胞往往會有“抱團”現(xiàn)象，抱團生長或死亡，個人認為應該勤換液或傳代，盡量避 免細胞抱團。

3.細胞生長迅速，強烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng)，用小瓶養(yǎng)的話，換液不及時，很容易死 亡。細胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代，并且一般為一傳三，或一傳四。

4.培養(yǎng)液：1640|DMEM|MEM|IMDM|a-MEM培養(yǎng)液，1L一般加碳酸氫鈉2g，并加雙抗，胎牛血清濃度*為12%，zui低不低于10%，有些細胞對胎牛血清高度依賴，比如WRO細胞，HT-22細胞，HA-VSMC細胞，NK-92細胞等。培養(yǎng)液PH應調(diào)為7.20-7.40之間。

5.防污染。L-02細胞生長迅速，較少發(fā)生污染，但常規(guī)措施應該做好。比如無菌操作，酒精 消毒等，培養(yǎng)瓶口建議過火，包括瓶蓋，應過火4秒左右。

6.凍存。-20一小時，-80次夜，液氮長期保存。強烈建議液氮長期保存，盡量不要在-80長期 保存，死亡率很高。

7.復蘇。調(diào)節(jié)水浴箱溫度為42℃，并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液溫度與室溫一 致。1分鐘內(nèi)融化細胞(禁止搖晃凍存管)，移取至試管內(nèi)，動作要輕，從試管管底開始慢慢上提 移液管，使細胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻，離心，洗2次。

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其它經(jīng)驗概括：

細胞類型 編輯 細胞類型根據(jù)是否附于支持物上生長的特性，分為 貼附型、懸浮型。 貼附型 細胞貼附在支持物表面生長，只依賴貼附才能生長的細胞叫做貼附型細胞(Anchorrage-dependent cells)這種現(xiàn)象與細胞分化有關。 貼附型細胞的分型 1.成纖維型細胞：(fibroblast) 來自中胚層 特點：與體內(nèi)成纖維細胞形態(tài)相似,胞體梭型或不規(guī)則三角形,中央有圓形核,胞質(zhì)向外伸出2～3個長短不同的突起。細胞在生長時呈放射狀,漩渦或火焰狀走行。 起源：細胞來自中胚層間充質(zhì)組織。 除真正的成纖維細胞、心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內(nèi)皮細胞。 注意：細胞在培養(yǎng)時成為成纖維型細胞是一種慣稱,與體內(nèi)細胞不同。 2.上皮型細胞(epithlium cell type) 來自外胚層。 特點：扁平不規(guī)則多角型、圓形核、細胞緊密相連成細胞增殖數(shù)目增多時,整個上皮膜隨之移動。邊緣細胞很少脫離細胞群而單獨活動“ 拉網(wǎng)”現(xiàn)象與起源內(nèi)外胚層組織有關。 組織: 皮膚表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道分上皮、肝、胰、肺泡上皮。 3. 游走型細胞(wandering cell type) 特點：在支持物上散在生長,不連接成片,胞質(zhì)伸出偽足或突起呈活躍的游走或變形運動,速度快不規(guī)則, 密度大連接成片呈多角形不易與其他類型的細胞 區(qū)別。 4. 多形型細胞(polymorphic cell type) 特點： 無規(guī)律的形態(tài)，如神經(jīng)細胞。 懸浮型 特點： 不貼附在支持物生長，胞體圓形，在培養(yǎng)液中生長空間大，可長時間的生長，繁殖旺盛便于做細胞代謝研究。S180肉瘤、血液里的白細胞、K562、 HL－60。 分型的目的： 方便描述細胞在培養(yǎng)過程中的形態(tài)變化。培養(yǎng)條件好時，細胞相對穩(wěn)定，可反映出起源、正常異常的區(qū)別，作為判定細胞生物學性狀指標。 強調(diào)：一般形態(tài)并不是一項可靠指標要受各方面影響。 如：反復開關溫箱、溫度、C02的濃度、培養(yǎng)基變堿、支原體、pH值。細胞在接種時呈三角型狀態(tài)，經(jīng)培養(yǎng)一定時間后，細胞在傳代前已形成上皮型細胞。

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