U251細胞株復蘇失敗原因分析

產品名稱：U251細胞

中文名稱：人膠質瘤細胞

種屬：人

來源：星形膠質細胞瘤；男性

培養條件：DMEM

生長狀態：貼壁

2017年新學期，迎著朝陽，放飛夢想，久別重逢，相聚一堂，百尺竿頭，更進一步，學無止境，自立自強，為國爭光，慧穎細胞庫為答謝各位莘莘學子的厚愛，在新學期開學之際，將慧穎細胞庫1223株細胞特惠出售，更多活動詳情，請致電市場部！

U251細胞株復蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細胞復蘇傳代后發現貼壁細胞狀態不好，形態不佳，透光度亦不好，如果老師認為復蘇過程沒問題，那就核實下是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養箱，二氧化碳濃度，培養基、PH值等環節。要么加高濃度FBS 15-20%，看看能否幫助貼壁，當然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細胞沒問題。

有的老師認為首先應該懷疑凍存，實際上復蘇出問題的可能非常小，因為操作簡單，而且死板。

1、確認下凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，但我們因為這個問題就兩種肺癌細胞和一種肝癌細胞專門做過試驗，這個是絕大部分人細胞復不活的一個原因。太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力，表現為先貼后死，原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序，不可逆轉的死亡。

2、老師的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質量非常重要，否則也會死亡。

3、老師的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過7%，大于5%，太多也不好。

4、老師在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。

5、老師的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。

6、如果老師的細胞污染，你是否能很快看到。從這個角度講建議去除離心這步。

7、老師的細胞在凍存前是否過密。

還有，我們是不贊成孵箱污染這個概念的，所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話，這個細菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌，問題在操作。我們的細胞房不換拖鞋，非常臟，別人的細胞都污染，很多細胞都污染到絕種，但我們的只污染一次（兩年內只有兩瓶），那次是因為當初有某高校組織學生參觀我們細胞庫給動過了，我們每次細胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染，我們會認為老師的復蘇培養細胞經驗還需要進一步熟練和積累經驗。

每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題，這個很重要，不能靠猜。

U251細胞株復蘇失敗原因分析

293AD   人胚腎細胞  人  胚腎；5型腺病毒轉化；女性   DMEM    貼壁   

T241    小鼠纖維肉瘤細胞    小鼠    纖維肉瘤    DMEM    貼壁   

RGM1    大鼠正常胃黏膜上皮細胞  大鼠    胃黏膜；上皮細胞；自發永生；Wistar  1640    貼壁   

BT  新生牛鼻甲細胞  牛  鼻甲；自發永生；Holstein    EMEM    貼壁   

USMC    大鼠血管平滑肌細胞  大鼠    血管平滑肌  DMEM    貼壁   

SBC-5   人小細胞肺癌細胞    人  小細胞肺癌；胸腔積液轉移；男性  1640    貼壁   

D407    人視網膜色素上皮細胞    人  視網膜；色素上皮細胞；自發永生；男性    DMEM    貼壁   

ETCC-007    人乳腺導管癌細胞    人  浸潤性導管癌；女性  DMEM    貼壁   

HLF-a  人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌；女性    1640    貼壁   

LK2 人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁   

ESC 人表皮干細胞    人  表皮干細胞  DMEM    貼壁   

MASMC   小鼠氣道平滑肌細胞  小鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

M109    小鼠肺癌細胞    小鼠    肺癌    DMEM    貼壁   

SK-GT-2 人胃癌細胞  人  胃底癌；男性    1640    貼壁   

MOLM-14 人急性髓系白血病細胞    人  急性髓系白血病；男性    IMDM    懸浮   

Kelly   人神經母細胞瘤細胞  人  神經母細胞瘤；女性  DMEM    貼壁   

NCI-H441    人肺腺癌細胞    人  乳頭狀肺腺癌；男性  1640    貼壁   

COLO-16 人皮膚鱗癌細胞  人  皮膚鱗癌；女性  DMEM    貼壁   

HEL299  人紅白細胞白血病細胞    人  紅白細胞白血病  1640    懸浮   

SK-UT-1 人子宮平滑肌瘤細胞  人  子宮平滑肌瘤；女性  EMEM    貼壁   

NB1-RGB 人皮膚成纖維細胞    人  皮膚；成纖維細胞；男性  DMEM    貼壁   

S91 小鼠黑色素瘤細胞    小鼠    黑色素瘤；雄性；DBA 1640    貼壁       

NCI-H2170   人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁       

RPMI2650    人鼻腔上皮細胞  人  頭頸鱗癌；胸腔積液轉移；男性    DMEM    貼壁       

NCI-H2073   人非小細胞肺癌細胞  人  肺腺癌；男性    1640    貼壁       

HSC-5   人皮膚鱗癌細胞  人  皮膚鱗癌；男性  DMEM    貼壁       

KYSE520 人食管鱗癌細胞  人  食管鱗癌；女性  DMEM    貼壁       

OCM-1   人眼脈絡膜黑色素瘤細胞  人  葡萄膜黑色素瘤；女性    DMEM    貼壁       

VE  人血管內皮細胞  人  血管；內皮細胞  DMEM    貼壁       

NT2/D1  人畸胎瘤細胞    人  畸胎瘤；肺轉移；男性    DMEM    貼壁       

YTMLC-90    人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁       

8305C   人甲狀腺癌細胞  人  甲狀腺癌；女性  DMEM    貼壁       

L132    人胚胎肺上皮細胞    人  胚肺；女性  DMEM    貼壁       

3T3-F442A   小鼠脂肪前體細胞    小鼠    脂肪前體細胞；雄性；Swiss albino    DMEM    貼壁       

SHI-1   人單核細胞白血病細胞    人  急性單核細胞白血病；男性    1640    懸浮       

HLE 人肝癌細胞  人  肝癌；男性  1640    貼壁       

OS-732  人骨肉瘤細胞    人  骨肉瘤  McCOY's   貼壁       

NCI-H526    人小細胞肺癌細胞    人  小細胞肺癌；骨髓轉移；男性  1640    貼壁   

ReNcell CX  人神經干細胞    人  神經干細胞  DMEM    貼壁   

IHH-4   人甲狀腺癌細胞  人  甲狀腺乳頭狀癌；男性    DMEM    貼壁   

VK2/E6E7    人陰道上皮細胞  人  陰道；上皮細胞；HPV16轉化；女性 DMEM    貼壁   

N1E-115 小鼠神經母細胞瘤細胞    小鼠    神經母細胞瘤；雄性；A/J EMEM    貼壁   

HMEL    永生上皮細胞    人  上皮細胞；永生化    1640    貼壁   

LN229   人膠質母細胞瘤細胞  人  膠質母細胞瘤；女性  DMEM    貼壁   

PANC05.04   人胰腺癌細胞    人  胰腺管癌；女性  DMEM    貼壁   

HRVEC   人視網膜微血管內皮細胞  人  視網膜微血管；內皮細胞  DMEM    貼壁   

rUCMSCs 大鼠臍帶間充質干細胞    大鼠    臍帶；間充質干細胞  DMEM    貼壁   

rRTEC   大鼠腎小管上皮細胞  大鼠    腎小管；上皮細胞    DMEM    貼壁   

HCC1569 人乳腺癌細胞    人  乳腺管癌；女性  DMEM    貼壁   

Mel-RM  人黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤；神經節轉移；男性  DMEM    貼壁   

WM-266-4    人黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤；皮膚轉移；女性    DMEM    貼壁   

UT-7    人急性成巨核細胞白血病細胞  人  急性成巨核細胞白血病；男性  1640    懸浮   

KPL1    人乳腺癌細胞    人  浸潤性導管癌；女性  EMEM    貼壁   

PLA-802 人惡性橫紋肌肉瘤細胞    人  肺泡橫紋肌肉瘤；男性    DMEM    貼壁   

CEF 雞胚成纖維細胞  雞  胚胎；成纖維細胞    DMEM/F12    貼壁   

143B    人骨肉瘤細胞    人  骨肉瘤；男性    McCoy’s 貼壁   

CT26.CL25   小鼠結腸癌細胞  小鼠    結腸癌； BALB/c 1640    貼壁   

C166    小鼠血管內皮細胞    小鼠    血管內皮    DMEM    貼壁   

A375SM  人惡性黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤；女性  DMEM    貼壁   

HKBML   人原發中樞淋巴瘤細胞    人  腦；淋巴瘤；男性    1640    懸浮   

為了應付季節變化CV-1細胞運輸、培養帶來的真菌等污染問題，公司特做以下建議：

1）細胞的運輸、轉移過程中，請勿打開自封袋；拿放細胞時請持瓶體，切勿在非無菌環球中碰觸、擰動瓶口封口膜位置

2）進入生物安全柜前，打開自封袋拿出培養瓶，噴上酒精放進操作臺（不建議使用酒精棉球擦拭），撕開封口膜后，用酒精燈外焰對瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養瓶，擰開瓶蓋（如是貼壁細胞，請用真空泵或吸管移除原配培養基，切勿讓瓶口處的液體回流進瓶內）

4）更換為含10%-20%血清的*培養基，嚴格按照無菌操作要求繼續培養

U251細胞株復蘇失敗原因分析